分光光度計,簡稱光度計,又稱光譜儀,已鄉自經(jīng)成(chéng)爲現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定員術量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。
分光光度計測量範圍一般包括波長(cháng)範圍爲3場雨80~780 nm的可見光區和波長(cháng)範圍爲200~380 nm的微鐘紫外光區。根據可測量波長(cháng)範圍的不同,分光光度計常分了麗爲:紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分從在光光度計。今天搜科采購管家重點爲您介紹的是可見分光光度計的選購注意事(s鄉開hì)項。
按照慣例,在選購儀器之前我們先要摸清自北劇己的需求:
你們實驗室使用分光光度計的常規應用冷南有哪些?
你們對(duì)分光光度計的靈敏度有何要求?
是否多人共用一台分光光度計?
是否需要同時(shí)測量多個樣數鄉(yàng)品?
要測量樣(yàng)品的體積範圍是怎樣(yàng)的?對城
對(duì)分光光度計的使用頻率和使用時(shí)道花長(cháng)是怎樣(yàng)的?
以上問題的答案,可能(néng)會(huì)影響您對(duì)區吧可見分光光度計的功能(néng)要求、靈活性要求、帶寬要求,是嗎歌否需要預設程序等智能(néng)功能就近(néng)等等。如果使用頻率高、時(shí)間長(cháng),對東的(duì)産品的質量和耐久性就(還愛jiù)有比較高的要求。
帶著(zhe)這(zhè)些問題,我們來看看可見分光光南兵度計産品都(dōu)有哪些功能(néng)和特點,其議作中又有哪些是選購時(shí)必須考慮的硬性指标。
1、儀器的原理和主要部件
分光光度計主要由光源、單色器、樣(yàng什分)品室、檢測器、信号處理器和顯示與存儲系統組成(遠業chéng)。
其工作原理是:
分光光度計采用一個可以産生多個波長(cháng)的光源,通過(guò)紅木系列分光裝置,從而産生特定波長(cháng)的光源,光線近友透過(guò)測試的樣(yàng)品後(hòu),部分光線被哥樹(bèi)吸收。樣(yàng)品對(duì)光玩技的選擇性吸收波長(cháng),以及相應的吸拍雪收系數是該樣(yàng)品的物亮生理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數後愛窗(hòu)可用同樣(yàng)條件將(ji他喝āng)該供試品配成(chéng)溶液,測定其吸收度,即可計用鐵算出供試品中該物質的含量。在可見光區,白歌除某些物質對(duì)光有吸收外,很多物質本身并沒(mé明如i)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過北睡(guò)處理使其顯色後(hòu)再測定,朋飛故又稱比色分析。
從以上原理,可以引出分光光度計最重要的配件——比色杯。
比色杯按照材質大緻分爲石英杯、玻璃議高杯以及塑料杯。根據不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。
2、分光光度計的常見用途
可見分光光度計是在可見光區域内對(duì)物質做定性、答線定量分析。常見的用途有以下幾種(zhǒng):
(1)比色法蛋白質定量
比色法的測定原理是組成(chéng)蛋白質的氨基酸(如酪氨酸歌生,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,産生有色街去物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白車慢質濃度。
(2)核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能(néng)。可以定量溶于路哥緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。定量不同類型的核酸,土海事(shì)先要選擇對(duì)應的系數。測試後(h短好òu)的吸光值經(jīng)過(g輛低uò)上述系數的換算,從而得出相應的海音樣(yàng)品濃度。
(3)OD600細菌細胞密能慢度
實驗室确定細菌生長(cháng)密度和生長(cháng)期,多根據經(j信吧īng)驗和目測推斷細菌的生長(cháng)密度。在遇到要求較高的實驗湖中,需要采用分光光度計準确測定細菌細胞司但密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長(chán木聽g)的标準方法。
3.性能(néng)參數指标
(1)波長(cháng)
波長(cháng)範圍、波長(cháng)查找方式、波坐報長(cháng)的準确度和重複性都(dōu)是需要考慮的重要指标。
波長(cháng)涵蓋範圍越大越好(hǎo),自動查找比手動查找好錢生(hǎo),所示波長(cháng計訊)和實際波長(cháng)越符合越好(hǎo)。
(2)帶寬
分光光度計的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。狹縫慢大寬度參數,以及狹縫寬度是固定的還(hái)是連續可選的,都(dōu內愛)代表著(zhe)該儀器的性能(néng)。
(3)能(néng)測量的樣(yàng)品量
樣(yàng)品量也是重要的考量因素。如果比色杯容量太大亮不,那測量珍貴樣(yàng)品時(舞來shí)是非常浪費的。現在很多光度計的城我樣(yàng)品量都(dōu)趨于微量化了。
(4)光度準确度
光度準确度指實際測量的光度讀數值與真好上值之差。肯定是準确度越高越好(hǎo)。
(5)雜散光
雜散光是光譜測量中誤差的主空化要來源。雜散光越小越好(hǎo)。
(6)穩定性
穩定性是精密測量儀器的硬性指标她見,測量結果肯定是越準确、越穩定越好(hǎo)。
(7)噪聲
噪聲肯定是越小越好(hǎo),這(zhè)個不用解個愛釋。
(8)儀器的大小
很多實驗室空間有限,滿足使用要求的基礎上線低,儀器肯定是占地面(miàn)積越小、重量越輕越好(hǎo)。